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    TOP10F`

    文字:[大][中][小] 2015-9-1    瀏覽次數:5414    

    TOP10F` Chemically Competent Cell 產品說明書





    產品規格(CAT#: DL1011)

    TOP10F`:                                                     100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

    保存條件(保質期):                            -80℃(6個月)


    基因型

    F′{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nup

     

    產品說明

    TOP10F`菌株來源于TOP10菌株。將F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子轉入TOP10菌株,即為TOP10F`。該F`因子攜帶lacIq 抑制子,可抑制trc,tac,lac等啟動子下游基因的表達,從而可以用于一些表達毒性蛋白質粒的擴繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取??捎糜跇嫿寺?,藍白斑篩選(如用于藍白斑篩選,需在培養基中加入IPTG誘導β-半乳糖苷酶基因的表達)實驗,具有四環素抗性。TOP10F`感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。


    操作方法

    1. TOP10F`感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質?;蜻B接產物) 并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YTLB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YTLB培養基上。

    5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少13 h。


    注意事項

    1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

    2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。

    3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。






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    TOP10F` Chemically Competent Cell 產品說明書


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